东晋时，浙江上虞祝家镇祝员外有女英台（乐蒂饰），貌美才高，求学心切。于是说服父母赴馀杭读书。途中邂逅会稽梁山伯（凌波饰），两人情投意合，折柳代香，结为兄弟。三年同窗，两人情逾骨肉，梁山伯一直不知拜把兄弟原为女子，祝英台却渐渐爱上这个义兄。祝员外见女儿三年不回，连书催归，祝英台只好退学。临行前托师母（高宝树）为媒，代为撮合。梁山伯回到书院，得悉真相，飞赴祝家镇。谁料祝员外早已将女儿许配马太守之子马文才。祝英台百般哀求，无奈父亲执意不肯退婚，梁山伯来迟一步，晴天霹雳。回去之后，梁山伯相思成疾，一病不起。祝英台惊闻噩耗，痛不欲生。出嫁途中，祝英台脱去吉服，到梁山伯墓前哭祭。突然天地变色，坟墓裂开，祝英台投墓殉情。两人化作一双彩蝶，永不分离。