一群由穷凶极恶的死刑犯组成的特种小队，小丑女（海德恩·沃尔克 配音）、死亡射手（尼尔·麦克唐纳 配音）、回旋镖队长（格雷格·艾里斯 配音）、黑蜘蛛（吉安卡洛·埃斯珀西多 配音）、冰霜杀手（詹尼弗·哈尔 配音）、鲨鱼王（约翰·迪·玛吉欧 配音）、克格勃野兽等人，受制于植入脑后的纳米炸药，他们被迫受命闯入阿卡姆疯人院，去取得一份被谜语人窃走的秘密名单。小队成员互相猜忌，各怀心思，哥谭的黑暗骑士又会不会任由自杀小队完成任务呢？囚禁于阿卡姆的小丑和其他恶人又会对任务造成怎样的影响？