自从人类豢养宠物的历史开始以来，猫和狗就是一对不共戴天的冤家，而作为主宰宇宙万物的人类并不知道，狡猾的猫族其实早就野心勃勃地妄图霸占地球，统治人类。为此，它们世代相传，研发各种高科技武器，卧底在人类身边伺机发动政变。如果不是忠心耿耿的狗族每次都在最危险的时刻千方百计地挫败猫族的疯狂计划，恐怕人类早就置身于猫族的统治之下。于是，猫族也就视狗族为眼中钉肉中刺，无时不在伺机将对方置之于死地，彻底除之而后快。有这么一天，工作在布洛迪夫人家一只叫巴迪的侦探狗突遭绑架，不知去向。巴迪的任务非常艰巨而重要，因为巴迪的主人、布洛迪教授 （ 杰夫·高布伦 饰）是一名研究人类抗狗过敏的科学家。布洛迪教授的研究一旦成功，将昭示着有更多的狗会得到人类的宠爱。在狗族看来万幸的事情，那绝对是猫族所不愿意看到的。所以，以布奇 （ 亚历克·鲍德温 配音）侦探狗为首的、护卫在布洛迪教授家附近的三只忠实的狗一致断定，巴迪是被猫族绑架的。巴迪遭绑架一个月后，狗族为布洛迪教授家重新选派了一只侦探狗。这只被小主人斯卡特 （亚历山大·波洛克饰）取名为卢（ 托贝·马奎尔 配音）的侦探狗初来乍到就遭到了猫族的栽赃陷害。不仅如此，布奇对于对卢这个新来的部下也不看好。但在猫族首领丁格策划的一次又一次窃取和破坏布洛迪最新配方的行动中，卢用自己的忠诚，捍卫了荣誉。布洛迪一家在丁格 （ 西恩·海耶斯 配音）的策划中被绑架后，狗族在世界狗会议中心投票表决，决定牺牲布洛迪一家，保护刚刚研制成功的抗狗过敏配方。卢已经成了小主人斯卡特的好朋友。尽管他不能左右世界狗会议中心作出的决定，但它仍要凭借自己的力量把主人一家从丁格的手里救出来。卢进入丁格的大本营梅森棉絮有限公司。此时，丁格正集结部队，准备向人类宣战。卢出现后，在布奇、沙姆、皮克的帮助下，不仅成功救出布洛迪一家，还又一次彻底摧毁了猫族妄图统治人类的野心。